KLONING GEN HORMON PERTUMBUHAN IKAN KERAPU TIKUS (CROMILEPTES ALTIVELIS) PADA VEKTOR EKSPRESI PROTEIN REKOMBINAN
10:55 AM
Edit
KLONING GEN HORMON PERTUMBUHAN IKAN KERAPU TIKUS (CROMILEPTES ALTIVELIS) PADA VEKTOR EKSPRESI PROTEIN REKOMBINAN
Ken Ratih Probosaria), Irvan Faizal a,, Ratu Siti Aliaha), Alimuddinb), M.Husni Amarullaha), Dody Irawana) dan Suhendar I Sachoemara)
a) Pusat Teknologi Produksi Pertanian – Badan Pengkajian dan Penerapan teknologi (BPPT), Jakarta;
b) Fakultas Perikanan dan lmu Kelautan – Institut Pertanian Bogor
Salah satu penghambat utama dalam budidaya ikan kerapu Tikus (Cromileptes altivelis) adalah pertumbuhannya yang lambat. Untuk mengatasi hambatan tersebut, dalam penelitian ini dilakukan produksi protein rekombinan hormon pertumbuhan oleh Escherichia coli (E. coli) yang mampu mengekspresikan protein. Pada tahapan awal, dilakukan konstruksi pGEMTeasy-ktGH yang membawa gen ktGH (hormon pertumbuhan ikan kerapu tikus), kemudian diperbanyak di dalam host non ekspresi E. coli DH5α dengan teknik elektroporasi. Selanjutnya dilakukan isolasi konstruksi pGEMTeasy-ktGH, untuk kemudian dipotong dengan menggunakan enzim EcoRI untuk mengisolasi gen ktGH. Gen ktGH diligasikan dengan vektor ekspresi pETBlue-2 (Novagen) (rasio molar 2,5:1) untuk menciptakan konstruksi baru, pBlueKNKT. Pada gen ktGH yang akan diligasikan dengan pETBlue-2 diberikan perlakuan End Conversion Mix (Novagen) agar tercipta sisi restriksi yang bersifat tumpul (blunt end) pada kedua sisinya. Konstruksi pBlueKNKT selanjutnya dikloning ke dalam E. coli Novablue. Untuk mendeteksi koloni positif yang mengandung konstruksi pBlueKNKT, dilakukan isolasi konstruksi pBlueKNKT, single digestion, dan PCR (insert dan orientasi). Setelah dideteksi, dapat diketahui bahwa konstruksi pBlueKNKT bersifat stabil dan mampu membawa gen ktGH di dalam E. coli Novablue.
Kata kunci: Hormon pertumbuhan ikan kerapu tikus (Cromileptes altivelis), kloning, pETBlue-2, E. coli Novablue